biotinilazione protocolli

Biotinilazione è il processo di collegamento biotina, o vitamina H, ad una proteina o altre molecole. Questa procedura scientifica è usato soprattutto nel campo delle biotecnologie e la ricerca di biologia molecolare che coinvolge DNA, proteine ​​e gli antigeni, che sono le molecole del sistema immunitario del corpo riconosce come invasori. protocolli biotinilazione includono la biotinilazione di anticorpi e peptidi, così come biotinylation superficie cellulare.

Biotinilazione di anticorpi

Per collegare biotina anticorpi proteine ​​producono quando un antigene entra nel corpo, i tecnici utilizzano bicarbonato di sodio (NaHC03) a pH 9; dimetilsolfossido (DMSO);

NHS-biotina e una sostanza salina chiamata PBS. I campioni vengono mescolati con bicarbonato di sodio, che viene poi aggiunto al NHS-biotina in DMSO. La soluzione viene quindi aggiunta agli anticorpi analizzate e incubata su un pezzo di materiale chiamato un rotatore per quattro ore a temperatura ambiente o per una notte a 39,2 gradi Fahrenheit. Infine, la soluzione viene diluita con PBS.

Biotinilazione cellulari di superficie

Nel protocollo biotinilazione superficie cellulare, i tecnici utilizzano coltura tissutale, tampone fosfato salino (PBS) a pH 7,4 e sulfosuccinimidyl-2- (biotinamido) soluzione tampone etil-1,3-dithiopropionate per bilanciare acidità contenente gruppi amminici e TrisCl, secondo protocolli attuale a cellule Science.The proteine ​​sono miscelati con la soluzione tampone di biotina e, decantato e centrifugato. contenuti solidi e proteine ​​specifiche vengono successivamente analizzati su piastra di gel di elettroforesi.

Biotinilazione di peptidi

Per eseguire la biotinilazione di peptidi, il reagente utilizzato è NHS-SS biotina, secondo Philip Shepherd in "Anticorpi monoclonali: un approccio pratico." Peptidi sono brevi frammenti di amminoacidi, le molecole che formano le proteine ​​e DNA. In questo protocollo, la soluzione commerciale NHS-SS biotina è disciolto in acqua. Poi il campione peptide viene aggiunto ad essa, insieme con bicarbonato di sodio per equilibrare l'acidità o pH. La soluzione viene quindi incubato in ghiaccio per due ore. I tecnici possono osservare il campione con o senza le molecole di biotina.