Protocolli per la Hoechst colorazione

Protocolli per la Hoechst colorazione


Le macchie Hoechst sono coloranti fluorescenti utilizzate per il DNA e RNA etichettatura tramite microscopia a fluorescenza e citometria a flusso tecniche. Hoechst 33258 e Hoechst 33342 sono i più utilizzati di queste macchie. Essi hanno la capacità di legarsi alle molecole di DNA, causando i nuclei e mitocondri ad apparire fluorescenti ai raggi ultravioletti. Protocolli per la Hoechst colorazione sono pratica comune nei laboratori biotecnologici e genetica, e comprendono tecniche di colorazione delle cellule utilizzando sia Hoechst 33258 e Hoechst 33342.

Hoechst 33342 HSC colorazione e Stem Cell purificazione protocollo

Questo protocollo è usato per colorare le cellule provenienti da topi midollo osseo. I tecnici preparano campioni di midollo osseo con una soluzione HBSS + sale, tampone HEPES e siero fetale bovino. Essi ruotano la soluzione e aggiungere un supporto pre-riscaldato DMEM. Hoechst macchia è poi aggiunto. La soluzione è collocato in un 98,6 gradi Fahrenheit bagno d'acqua per esattamente 90 minuti, riporta il Dipartimento di Immunologia presso l'Università di Pittsburgh. segmenti di DNA appaiono fluorescenti sotto un citometro.

Hoechst 33342 colorazione del DNA

Durante questo protocollo, i tecnici sospesi Hoechst 33342 macchia in acqua distillata, aggiungere 2 percento fetale di vitello siero campione cellulare, mantenendo il pH a 7,2 con l'aiuto di una soluzione tampone. Le cellule vengono poi incubate a 98,6 ° C per un'ora, e immediatamente analizzati con un pezzo di materiale chiamato citometro.

Stained DNA è quindi visibile e fluorescenti, secondo l'Università del Michigan Health System.

Rilevamento DNA utilizzando DNA-binding Fluorocromo Hoechst 33258

Questa protocolli utilizzati un pezzo di materiale chiamato spettrofotometro per analizzare segmenti di DNA e RNA. I tecnici usano Hoechst 33258 lavoro campioni di DNA di timo di soluzione e del polpaccio. Fanno anche una soluzione separata utilizzando il campione di DNA e una sostanza chimica chiamata bromuro di etidio. Più tardi, si confrontano i risultati di colorazione delle cellule in entrambi i supporti, utilizzando uno spettrofotometro, secondo i protocolli attualmente in Citometria.